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全自动蛋白纯化仪器——全自动蛋白纯化中更换缓冲液的意义
2020-07-21
随着分子生物学的发展,越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术,蛋白纯化工作非常复杂,除了要保证纯度外,蛋白产品还必须保持其生物学活性。全自动蛋白纯化仪器的纯化工艺必须能够每次都能产生相同数量和质量的蛋白,重复性良好。这就要求全自动蛋白纯化仪器应用适应性非常强的方法而不是用能得到纯蛋白的方法去纯化蛋白。
虽然全自动蛋白纯化仪器更换缓冲液不能提高蛋白纯度,但它却在蛋白纯化方案中起着极其重要的作用。不同的蛋白纯化方法需要不同pH及不同离子强度的缓冲液。假如全自动蛋白纯化仪器用硫酸铵将蛋白沉淀出来,毫无疑问蛋白是处在高盐环境中,需要想办法脱盐,可用的方法有利用半透膜透析,通过勤换透析液体去除盐分。此法需几个小时,通常要过夜,也难以用予大规模纯化中。新型全自动蛋白纯化仪器将透析膜夹在两个板中间,板的一侧加缓冲液,另一侧加需脱盐的蛋白溶液,并在蛋白溶液一侧通过泵加压,可以使两侧溶液在数小时内达到平衡,若增加对蛋白溶液的压力,还可迫使水分和盐更多通过透析膜进入透析液达到对蛋白浓缩的目的。
也有脱盐柱,柱内的填料是小孔径的颗粒,蛋白分子不能进入孔内,先于高浓度盐离子从柱中流出,从而使二者分离。全自动蛋白纯化仪器的每一步都会影响着目的蛋白,缓冲液平衡的步骤尤甚。蛋白会结合在任何它能接触的表面上,剪切力、起泡沫和离子强度的快速变化很容易让蛋白失活。
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