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全自动蛋白纯化仪器——全自动蛋白分离纯化方法之凝胶过滤层析法
2020-07-24
由于蛋白质具有颗粒大且不同蛋白质分子大小不同等特性,因而全自动蛋白纯化仪器能够依据蛋白质分子大小不同而停止别离,这种别离办法有透析、超滤、离心和凝胶过滤。在此其中凝胶过滤是依据分子大小别离蛋白质混合物极为有效的办法之一,也称为分子排阻层析或分子筛层析。
全自动蛋白纯化仪器的凝胶过滤能够应用被分离物质分子大小不同及固定相(凝胶)具有分子筛的特性,将被别离物质各成分依照分子大小分开,从而到达别离的目的。在一些全自动蛋白纯化仪器中,凝胶过滤层析法常与其他层析办法配合着运用。
凝胶层析是全自动蛋白纯化仪器利用分子筛作用对蛋白质进行分离。凝胶是具有三维空间多孔网状结构的物质,经过适当的溶液平衡后,装入层析柱。一种含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶层析柱时,大分子物质不易进入凝胶颗粒的微孔,只能分布于颗粒之间,因此在全自动蛋白纯化仪器洗脱时向下移动的速度较快,会先被洗脱。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外,还可以进入凝胶颗粒的微孔中,洗脱时向下移动的速度较慢,随后被洗脱。因此,蛋白质分子按分子大小被分离。
凝胶过滤层析法用于全自动蛋白纯化仪器的分离纯化,具有操作条件温和,适用于别离不稳定的化合物的特性。且凝胶颗粒不带电荷,不与被别离物质发作反响,因而溶质回收率接近100%,而且全自动蛋白纯化仪器简单、别离效果好、重现性强,凝胶柱还能够重复运用,所以该办法被普遍应用于蛋白质等大分子物质非别离纯化、分子质量测定、脱盐等实验中。
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