应用案例
重组蛋白GFP分离纯化实验
2023-02-03
一、亲和层析
仪器推荐 |
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层析填料: |
NW Rose Ni FF (M07D2203) CV:1mL |
样品: |
GFP发酵液经破碎离心上清液,按照20mg/mL载量上样 |
缓冲液: |
平衡液: 20mM Tris-HCl 0.5M NaCl PH7.5 淋洗液: 20mM Tris-HCl 0.5M NaCl PH7.5 洗杂液1: 20mM Tris-HCl 0.5M NaCl 0.5M咪唑 PH7.5,20% 洗脱液1: 20mM Tris-HCl 0.5M NaCl 0.5M咪唑 PH7.5,55% 洗脱液2: 20mM Tris-HCl 0.5M NaCl 0.5M咪唑 PH7.5 |
流速: |
0.3ml/min |
运行方法: |
平衡5CV--上样--淋洗5CV--洗杂5CV--洗脱①5CV—洗脱②5CV--平衡5CV |
回收率% |
纯度% |
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洗脱液 |
90 |
83.4 |
二、疏水层析
仪器推荐 |
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层析填料: |
UniHR Butyl 30L( L01W15KB) CV:1mL |
样品: |
亲和洗脱液调节,Cond、pH与平衡液一致,全部上样 |
缓冲液: |
平衡液:20mM Tris-HCl + (NH4)2SO4 PH7.5,Cond60ms/cm 洗脱液:20mM Tris-HCl 再生液:0.1M NaOH |
流速: |
0.3ml/min |
运行方法: |
平衡5CV--上样--再平衡5CV--洗脱5CV--CIP5CV--平衡5CV |
收集流穿液检测收率74.7% |
回收率% |
纯度% |
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流穿液 |
74.7 |
92.3 |
三、脱盐
仪器推荐 |
SDA系列 SCG-P系列 |
层析填料: |
G-25 CV:53mL |
样品: |
GFP疏水流穿液 |
缓冲液: |
平衡液: 20mM Tris-HCl,PH7.5 |
流速: |
0.3ml/min |
运行方法: |
平衡-上样--淋洗 |