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全自动蛋白纯化仪器——全自动蛋白纯化一般程序步骤
2020-08-01
蛋白质是复杂的生物大分子,在生物体中扮演着重要的角色。它们在细胞内执行众多任务,涉及生物体的组织和器官的结构发育和位置、功能及其调控。对于分析蛋白质个体和蛋白质复合物,全自动蛋白纯化仪器对蛋白质的纯化是这些研究的基石。全自动蛋白纯化仪器分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分级、细分级三步。 _进口蛋白纯化仪_蛋白纯化设备_蛋白纯化系统_全自动蛋白纯化仪器
全自动蛋白纯化仪器分离纯化某种蛋白质,首先要把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来并保持原来的天然状态,不丢失生物活性。为此,要根据不同的情况,选择适当的方法,将组织和细胞破碎。破碎细菌细胞壁的常用方法有超声波破碎,与砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理等。组织和细胞破碎后,选择适当的缓冲液把所要的蛋白提取出来。细胞碎片等不溶物用离心或过滤的方法除去。 _进口蛋白纯化仪_蛋白纯化设备_蛋白纯化系统_全自动蛋白纯化仪器
如果所要的蛋白主要集中在某一细胞组分,如细胞核、染色体、核糖体或可溶性细胞质等,则可利用全自动蛋白纯化仪器差速离心的方法将它们分开,收集该细胞组分作为下步纯化的材料。如果碰上所要蛋白是与细胞膜或膜质细胞器结合的,则必须利用超声波或去污剂使膜结构解聚,然后用适当介质提取。 _进口蛋白纯化仪_蛋白纯化设备_蛋白纯化系统_全自动蛋白 纯化仪器
当蛋白质提取液获得后,选用一套适当的方法,将所要的蛋白与其他杂蛋白分离开来。一般这一步的分离用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。这些方法的特点是简便、处理量大,既能除去大量杂质,又能浓缩蛋白溶液。有些蛋白提取液体积较大,又不适于用沉淀或盐析法浓缩,则可采用超过滤、凝胶过滤、冷冻真空干燥或其他方法进行浓缩。 _进口蛋白纯化仪_蛋白纯化设备_蛋白纯化系统_全自动蛋白 纯化仪器
样品经全自动蛋白 纯化仪器粗分级分离以后,一般体积较小,杂蛋白大部分已被除去。进一步纯化,一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳法,包括区带电泳、等电点聚焦等作为最后的纯化步骤。 _进口蛋白纯化仪_蛋白纯化设备_蛋白纯化系统_全自动蛋白纯化仪器
结晶是全自动 蛋白纯化仪器分离纯化的结束步骤。尽管结晶过程并不能保证蛋白一定是均一的,但是只有某种蛋白在溶液中数量上占有优势时才能形成结晶。结晶过程本身也伴随着一定程度的纯化,而重结晶又可除去少量夹杂的蛋白。由于结晶过程中从未发现过变性蛋白,因此蛋白的结晶不仅是纯度的一个标志,也是断定制品处于天然状态的有力指标。 _进口蛋白纯化仪_蛋白纯化设备_蛋白纯化系统_全自动蛋白纯化仪器
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