全自动蛋白纯化仪器：蛋白纯化的一般原则

随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，但分子生物学的上游工作往往并非是我们的目标，关键是要拿到纯的表达产物，以研究其生物学作用。相对与上游工作来说，蛋白纯化工作非常复杂，除了要保证纯度外，蛋白产品还必须保持其生物学活性。蛋白纯化设备的纯化工艺必须能够每次都能产生相同数量和质量的蛋白，重复性良好。

在实验室条件下，想要实现蛋白纯化的大规模生产应用，且在每日的应用中要有很好的重复，就必须了解蛋白纯化设备的基本原则和各种蛋白纯化技术的原理、优点及局限性，以期对蛋白纯化设备的纯化方法选择及整体方案的制定提供一定的指导。

蛋白纯化设备要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，还有各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，从而将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。利用每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性的这些差异，可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。

蛋白纯化设备主要分为粗分离阶段和精细纯化阶段两个阶段。蛋白纯化设备的粗分离阶段主要是分离目标蛋白和其他细胞成分，样本体积大、成分杂，因此使用的树脂容量高、流速高、颗粒大，粒度大，而且可以使蛋白质和污染物迅速分离，防止目标蛋白质被降解。蛋白纯化设备的精细纯化阶段需要更高的分辨率，以将目的蛋白与大小和理化性质接近的那些蛋白区别开来。为了提高分辨率，需要使用较小的树脂粒子，通常还需要同时考虑使用离子交换机和疏水柱，综合考虑树脂的选择性和柱效两个因素。