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国产蛋白纯化系统:亲和纯化的问题分析解决(二)

2017-11-11 14:37:26 点击数:634

国产蛋白纯化系统

国产蛋白纯化系统小编今天继续和大家浅谈一下亲和纯化的问题分析解决,下面就有小编给大家介绍。

  蛋白挂在柱子上洗脱不下来,怎么解决?
(1)洗脱条件太温和(组氨酸标记的蛋白质仍然结合在柱上,结合力较强) 策略:用增加咪唑的梯度洗脱或降低 pH 来找出最佳的洗脱条件。

(2)降低 PH 的方法洗脱的,因 为若 PH 低于 3.5,会导致镍离子脱落 策略:改变洗脱办法,咪唑竞争性洗脱

(3)蛋白已沉淀在柱上 策略:减少上样量和孵育的时间,试用去污剂(1%-2%Tritonx-100)或改变 NaCl 的浓度,或在变性条件下洗脱(用 8M 脲,或 6M 盐酸胍),最终也可在洗脱 Buffer中加入 2mMDTT 或者 0.5%肌氨酸钠进行洗脱。

(4)非特异性疏水或其他相互反应 策略:加非离子去污剂到洗脱缓冲液(如,2%Triton X-100)或增加 NaCl 的浓度。
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