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SCG蛋白纯化系统公司:亲和纯化的问题分析解决(一)

2017-11-9 14:35:12 点击数:636

SCG蛋白纯化系统

今天聊聊亲和纯化的问题分析解决,下面由SCG蛋白纯化系统公司赛谱仪器为大家介绍。

1.通过 His 标签纯化的蛋白,杂带比较多,如何改进?
(1)如果纯化的是上清,蛋白酶会部分降解目的蛋白,可通过加多种蛋白酶抑制剂改进。
(2)可提高杂蛋白与镍柱结合起始咪唑浓度,以降低杂蛋白与镍柱的亲和力。
(3)杂蛋白和目的蛋白结合,可通过超声前加入去垢剂的方式消除
2.镍柱使用中出现棕色是怎么回事?
出现这样的情况,主要是缓冲液中 DTT 的影响, DTT 会对镍柱的颜色和纯化效率有很大的影响,在碱性的缓冲液条件下镍离子会被 DTT 还原生成
棕色的沉淀,所以所有镍柱的生产商都强调要尽量避免 DTT 的参与(一般的镍柱耐受小于 5mM DTT,推荐缓冲液中不要超过2mM DTT)。
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