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离子交换蛋白纯化系统公司的基本操作

离子交换蛋白纯化系统公司的基本操作

  • 分类:行业新闻
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  • 发布时间:2020-03-05 16:32
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离子交换蛋白纯化系统公司的基本操作

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   离子交换蛋白纯化系统公司为蛋白等生物样品的纯化制备而专门设计,高性能输液泵不仅耐受高压,而且在低温低压下具有良好的稳定性,为低压色谱柱提供安全保证;采用DAD检测器,可方便实时监测分离组分的纯度。另外,SCG配备酸度/电导检测器可精准即时监测分离时的梯度环境。

 

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   离子交换蛋白纯化系统的基本操作  

   1、DEAE-纤维素的预处理:  

   称取2gDE-52,置于砂芯漏斗中,先在20mL0.5mol/LNaOH中浸泡30min,然后用蒸馏水淋洗至pH=8.0,再用20mL0.5mol/LHCl浸泡30min,然后用蒸馏水淋洗至pH=4.0。zui后用20mL0.5mol/LNaOH浸泡30min后蒸馏水洗至pH=8.0。用洗脱液A浸泡已处理好的DEAE—纤维素,并更换1~2次。

   2、装柱取1.5ⅹ20cm层析柱一根,如图1装柱。装入约10mL洗脱液A,打开下活塞让缓冲液慢慢滴出,同时,将悬浮于适量洗脱液A中的DEAE—纤维素一边搅动一边倒入层析柱中,让其自然沉降到全部加入为止。用洗脱液A以1.0ml/min的流速平衡柱子,直到流出液pH与起始缓冲液的完全相同为止。

   注:装柱时交换剂zui好一次倒入,若分次倒入时,则须在再次添加之前将界面处的交换剂搅起,以保证柱床不分节。柱面要平整,柱中无气泡。

   3、上样

   上述平衡过程完毕后,待液面离纤维素沉降面约1cm后,关闭活塞。用滴管将样品沿管壁小心加入,待全部样品进入柱后,在柱床面上加一层洗脱液A。上样量占柱体积的2.5%左右。

   4、洗脱

   连接洗脱瓶,打开柱下口开始洗脱。先用洗脱液A洗脱1个柱体积(收集在一个试管中),流速约0.5ml/min;然后用洗脱液B中5个梯度分别洗脱一个柱体积,分别收集,流速约0.5ml/min。

   5、鉴定收集各个洗脱组分,紫外吸收法测定每个组分的蛋白含量。

   蛋白纯化系统公司——苏州赛谱仪器有限公司致力于开发用于分离纯化蛋白、全自动蛋白层析系统、抗体、天然产物及小分子药物等生物制品领域的精密纯化系统,现公司已经推出多种不同配置的纯化系统,从实验室研发级别到工业生产放大级别,为客户提供一站式的选购体验,力争为客户提供稳定实用的产品以及完善的产品服务体系。公司已与国内外众多著名的生物制药(包括CRO企业)企业建立了良好的合作,产品各项指标达到同类型产品国际领先水平,获得了众多客户的认可和好评。蛋白纯化系统公司欢迎大家前来咨询。

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发布时间:2020-02-24 00:00:00

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